20S Proteasome α7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401897-ACT

PSMA7 codifica la subunità α7 del proteasoma 20S, un componente strutturale essenziale della particella core 20S che ne supporta l’assemblaggio e il meccanismo di gating della camera proteolitica nel sistema ubiquitina–proteasoma. Consentendo il turnover ATP-dipendente dei substrati poliubiquitinati tramite il proteasoma 26S, PSMA7 contribuisce alla proteostasi, alla progressione del ciclo cellulare, al processamento dell’antigene per la presentazione tramite MHC di classe I e alla regolazione della segnalazione responsiva allo stress. L’attività del proteasoma interseca la segnalazione di NF-κB attraverso la degradazione di IκB e influenza vie di controllo della qualità proteica collegate allo stress ossidativo e alle risposte alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response). La disregolazione delle subunità del proteasoma, inclusa PSMA7, è spesso studiata in contesti di proliferazione alterata, segnalazione infiammatoria e modelli di aggregazione proteica neurodegenerativa.

20S Proteasome α7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSMA7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

20S Proteasome α7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSMA7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSMA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 20S Proteasome α7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSMA7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 20S Proteasome α7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 20S Proteasome α7 nelle cellule tumorali con espressione di PSMA7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.