Plásmido CRISPR de Activación (h) 20S Proteasome α3: sc-401857-ACT

PSMA3 codifica la subunidad α3 del proteasoma 20S, un componente central del barril catalítico 20S que constituye el núcleo proteolítico del sistema ubiquitina–proteasoma. Al favorecer el ensamblaje del proteasoma 26S y la degradación regulada de proteínas de vida corta y mal plegadas, la α3 ayuda a mantener la proteostasis y modula redes de señalización que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la transcripción adaptativa al estrés. La actividad del proteasoma también influye en el procesamiento de antígenos para su presentación por el MHC de clase I y en el recambio de efectores de vías como los reguladores de NF-κB, vinculando así la función de PSMA3 con la inflamación y la vigilancia inmunitaria. La desregulación de la capacidad del proteasoma y de la composición de sus subunidades se asocia con la aptitud de las células cancerosas, las proteinopatías neurodegenerativas y respuestas alteradas al estrés oxidativo o del retículo endoplásmico, lo que convierte a PSMA3 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la biología de enfermedades impulsadas por la proteostasis.

20S Proteasome α3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PSMA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

20S Proteasome α3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PSMA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PSMA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 20S Proteasome α3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PSMA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 20S Proteasome α3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 20S Proteasome α3 en células tumorales con expresión de PSMA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.