β-defensin 124 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410392-ACT

DEFB124 kodiert das humane β-Defensin 124, ein kleines kationisches Peptid aus der Defensin-Familie, das zur angeborenen epithelialen Immunabwehr durch direkte antimikrobielle Aktivität und die Modulation lokaler Entzündungsreaktionen beiträgt. β-Defensine sind an Prozessen der mukosalen Barriere beteiligt und können chemotaktische Signale sowie Zytokin-Netzwerke beeinflussen, die die Rekrutierung von Leukozyten und die Interaktionen zwischen Wirt und Mikrobe prägen. Veränderte Defensin-Expressionsmuster wurden mit einer dysregulierten mukosalen Immunität und chronisch-entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von DEFB124 in der Infektionsbiologie und der Immunhomöostase unterstützt. Im Kontext des Reproduktions- und Urogenitaltrakts werden Mitglieder der Defensin-Familie zudem hinsichtlich ihrer Rolle bei der Aufrechterhaltung der Barriereintegrität und des Mikrobiom-Gleichgewichts untersucht.

β-defensin 124 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DEFB124-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

β-defensin 124 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DEFB124-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DEFB124-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen β-defensin 124-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DEFB124-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von β-defensin 124-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des β-defensin 124-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DEFB124-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.