Partículas Lentivirales de Activación (h) β-Amyloid: sc-400520-LAC

APP codifica la proteína precursora de amiloide, una glicoproteína transmembrana de tipo I que sufre un procesamiento secuencial por las secretasas α, β y γ para generar múltiples fragmentos bioactivos, incluidos los péptidos β-amiloide. El tráfico de APP a través de los sistemas secretor y endolisosomal la vincula con la renovación de membranas, la función sináptica, el crecimiento de neuritas y la adhesión celular, mientras que la escisión dependiente de secretasas conecta la biología de APP con la proteólisis intramembrana regulada. El procesamiento amiloidogénico desregulado y la homeostasis alterada de Aβ son características moleculares centrales estudiadas en la enfermedad de Alzheimer y la angiopatía amiloide cerebral, y la expresión de APP también se investiga en contextos de respuestas al estrés neuronal y proteostasis. Los modelos in vitro exploran con frecuencia las interacciones de la vía de APP con el metabolismo del colesterol, la clasificación endosomal, la función del sistema autofagia-lisosoma y la señalización inflamatoria en células gliales y neuronales.

Las partículas de activación lentiviral β-Amyloid (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de APP en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral β-Amyloid (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción APP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de β-Amyloid. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo APP y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.