α-sarcoglycan Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422904
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- α-sarcoglycan O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico α-sarcoglycan, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:α-sarcoglycan Anticorpo (D-7): sc-271321
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
α-sarcoglycan Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422904 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Sgca codifica a α-sarcoglicana, um componente transmembranar central do complexo de sarcoglicanas dentro do complexo distrofina–glicoproteína, que estabiliza o sarcolema e dá suporte à transmissão de força no músculo esquelético e cardíaco. Ao ligar a matriz extracelular ao citoesqueleto, a α-sarcoglicana contribui para a integridade da membrana e para a mecanotransdução durante a contração, protegendo as miofibras de danos induzidos pela contração. A interrupção de Sgca perturba a montagem do complexo de proteínas associadas à distrofina e compromete a estabilidade das fibras musculares, fornecendo uma base molecular para fenótipos semelhantes aos de distrofia muscular em sistemas modelo. Assim, o Sgca murino é um alvo-chave para estudar a sinalização de adesão do sarcolema, programas de degeneração/regeneração muscular e vias subsequentes de remodelamento inflamatório e fibrótico.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sgca em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sgca, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sgca na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína α-sarcoglycan.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sgca para a investigação da sinalização de α-sarcoglycan, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sgca críticos para a função α-sarcoglycan
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sgca para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo α-sarcoglycan Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo α-sarcoglycan Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sgca. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo α-sarcoglycan Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR α-sarcoglycan (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sgca para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sgca definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.