ZNF143 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423169-ACT

Das Mausgen **Zfp143** kodiert den Transkriptionsfaktor **ZNF143**, ein sequenzspezifisches DNA-bindendes Protein, das die Promotorarchitektur und breit angelegte Transkriptionsprogramme unterstützt. ZNF143 ist an der RNA-Polymerase-II-abhängigen Transkription, der Chromatinorganisation sowie der Regulation von Gen-Netzwerken beteiligt, die mit Zellzyklus und Replikation verknüpft sind, einschließlich Genen, die mit dem Start der DNA-Replikation und der Genomstabilität zusammenhängen. Aufgrund dieser Funktionen wird eine veränderte ZNF143-Expression häufig im Kontext der Kontrolle der Proliferation, transkriptioneller Fehlregulation und stressabhängigen Umgestaltung der Genexpression untersucht. In Mausmodellen dient Zfp143 als nützlicher Knotenpunkt, um regulatorische Schaltkreise zu analysieren, die Entwicklungsprogramme und krankheitsrelevante transkriptionelle Zustände beeinflussen.

ZNF143 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Zfp143-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF143 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Zfp143-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Zfp143-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF143-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Zfp143-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF143-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF143-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Zfp143-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.