ZC3H4 Double Nickase Plasmid (h): sc-411693-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZC3H4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZC3H4 Double-Nickase-Plasmid (h) und ZC3H4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ZC3H4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZC3H4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-411693-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZC3H4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411693-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZC3H4 kodiert ein CCCH-Typ-Zinkfinger-RNA-bindendes Protein, das an nukleärem RNA-Stoffwechsel und der Kontrolle der Transkription beteiligt ist. Aktuelle Befunde bringen ZC3H4 mit der Regulation der Termination der Transkription durch RNA-Polymerase II sowie der Verarbeitung neu entstehender Transkripte in Verbindung und beeinflussen damit Genexpressionsprogramme und die nukleäre RNA-Überwachung. Durch die Modulation des RNA-Schicksals an der Schnittstelle zwischen Chromatin und RNA kann ZC3H4 Signalwege beeinflussen, die Zellzustandsübergänge, Stressantworten und Proliferation steuern. Eine gestörte Regulation von Transkriptionstermination und RNA-Prozessierung wird häufig bei Krebs und anderen Störungen der Genexpression beobachtet, was ZC3H4 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen dieser Prozesse macht.
ZC3H4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ZC3H4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ZC3H4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ZC3H4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ZC3H4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.