YTHDC2 Double Nickase Plasmid (h): sc-407254-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das YTHDC2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- YTHDC2 Double-Nickase-Plasmid (h) und YTHDC2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf YTHDC2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
YTHDC2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407254-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
YTHDC2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407254-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
YTHDC2 kodiert eine RNA-Helikase mit YTH-Domäne, die als m6A-Reader fungiert und die Erkennung von N6‑Methyladenosin‑modifizierten Transkripten mit einer ATP‑abhängigen Umstrukturierung von Ribonukleoprotein-Komplexen koppelt. In menschlichen Zellen ist YTHDC2 an der posttranskriptionellen Regulation beteiligt, indem es die mRNA‑Stabilität, die Translationseffizienz und RNA‑Überwachungswege beeinflusst und so in breitere Netzwerke des RNA‑Stoffwechsels eingebunden ist. Es wurde mit der Kontrolle zellzyklusassoziierter Transkripte und stressresponsiver Genexpressionsprogramme in Verbindung gebracht, indem es selektiv modifizierte RNAs verarbeitet. Eine fehlregulierte Expression oder Aktivität von YTHDC2 wurde mit veränderten Signaturen der RNA‑Prozessierung in mehreren Krankheitskontexten assoziiert, was seine Untersuchung als Knotenpunkt der epitranskriptomischen Regulation unterstützt.
YTHDC2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des YTHDC2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von YTHDC2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die YTHDC2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit YTHDC2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.