Plasmide CRISPR d'Activation (h) XRN1: sc-401910-ACT

XRN1 humain code une exoribonucléase 5′–3′ hautement conservée, qui pilote la dégradation des ARNm dans le cytoplasme en dégradant les transcrits décapés et en éliminant les fragments d’ARN générés au cours du renouvellement des ARN. XRN1 se coordonne avec les facteurs de décapage et les corps de traitement (P-bodies) pour assurer l’homéostasie du transcriptome, en influençant des voies telles que la dégradation médiée par les codons stop prématurés (NMD), le silençage médié par les microARN et la détection immunitaire innée des ARN aberrants. En régulant la stabilité des ARNm impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress, XRN1 contribue au maintien de la protéostasie et de la fidélité des voies de signalisation. Une dégradation des ARN dérégulée et une activité altérée de XRN1 ont été associées à des programmes d’expression génique aberrants observés en oncologie, à des phénotypes neurodéveloppementaux et aux interactions virus–hôte, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation post-transcriptionnelle.

XRN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XRN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

XRN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XRN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XRN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de XRN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XRN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de XRN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie XRN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de XRN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.