Plasmide CRISPR d'Activation (h) XRCC3: sc-405570-ACT

XRCC3 code un paralogue de RAD51 qui intervient dans la réparation des cassures double brin de l’ADN par recombinaison homologue et dans le maintien de la stabilité des fourches de réplication. XRCC3 contribue à la formation et à la régulation des filaments nucléoprotéiques de RAD51, favorisant une réparation fidèle pendant les phases S/G2 et limitant les aberrations chromosomiques. Par son rôle dans la surveillance du génome, XRCC3 influence les réponses cellulaires au stress réplicatif et aux agents endommageant l’ADN, l’inscrivant dans des voies qui préservent l’intégrité chromosomique. Une activité ou une expression altérée de XRCC3 a été associée à une instabilité génomique accrue et a été étudiée dans le contexte de la susceptibilité au cancer et de la biologie tumorale.

XRCC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XRCC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

XRCC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XRCC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XRCC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de XRCC3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XRCC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de XRCC3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie XRCC3 dans les cellules tumorales présentant une expression de XRCC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.