Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) XPG: sc-416940-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)XPG consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa XPG (h) y el plásmido de doble nickasa XPG (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ERCC5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: XPG Anticuerpo (8H7): sc-13563
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) XPG | sc-416940-NIC | 20 µg | $410.00 |
ERCC5 codifica la endonucleasa XPG, una nucleasa específica de estructura esencial para la reparación por escisión de nucleótidos (NER) que corta el ADN dañado en el lado 3′ de las burbujas que contienen la lesión. XPG actúa dentro del complejo de reparación centrado en TFIIH y contribuye a la estabilidad del genoma al resolver fotoproductos inducidos por UV y aductos voluminosos, limitando así el estrés replicativo y la acumulación de mutaciones. Además de la NER canónica, XPG se ha relacionado con la reparación acoplada a la transcripción y con el procesamiento de R-loops y otras estructuras secundarias del ADN que convergen con la señalización ATR/CHK1. La disfunción patogénica de ERCC5 se asocia a trastornos caracterizados por respuestas deficientes al daño del ADN y un deterioro celular acelerado, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar las relaciones genotipo–fenotipo en la biología de la reparación del ADN.
XPG El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERCC5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERCC5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERCC5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERCC5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.