Plásmido Doble Nickase (m) XBP1: sc-423727-NIC

Xbp1 codifica XBP1, un factor de transcripción de tipo cremallera de leucina básica (bZIP) que actúa como efector central de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) aguas abajo del empalme de ARNm mediado por IRE1α. El XBP1 activo impulsa programas transcripcionales que amplían la capacidad de plegamiento del retículo endoplásmico, regulan la degradación asociada al RE y remodelan la biosíntesis de lípidos para restablecer la proteostasis durante el estrés secretor. En sistemas murinos, XBP1 se utiliza ampliamente para estudiar la diferenciación y la función de células secretoras profesionales, la adaptación metabólica y el crosstalk de la señalización inflamatoria en tejidos que experimentan estrés crónico del RE. La actividad desregulada de XBP1 se ha implicado en modelos de enfermedad metabólica, neurodegeneración y patología mediada por el sistema inmunitario, debido a una señalización persistente de la UPR y a la alteración de vías de citocinas y de supervivencia.

XBP1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Xbp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Xbp1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Xbp1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Xbp1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.