Xanthine Oxidase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401185-ACT

XDH codifica a xantina oxidoredutase, que pode atuar como xantina oxidase para catalisar as etapas finais do catabolismo de purinas, convertendo hipoxantina em xantina e xantina em ácido úrico. Essa enzima é uma fonte importante de espécies reativas de oxigênio (ROS) durante reações de transferência de elétrons, conectando o metabolismo de purinas à homeostase redox celular e à sinalização de estresse oxidativo. A atividade de XDH interage com vias inflamatórias e responsivas à hipóxia e contribui para alterações no endotélio e no microambiente tecidual sob estresse metabólico. A atividade desregulada da xantina oxidase e o equilíbrio alterado entre urato e ROS são frequentemente investigados em contextos como a biologia associada à hiperuricemia, disfunção cardiometabólica e modelos de isquemia-reperfusão.

Xanthine Oxidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XDH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Xanthine Oxidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XDH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XDH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Xanthine Oxidase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XDH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Xanthine Oxidase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Xanthine Oxidase em células tumorais com expressão de XDH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.