WTAP Double Nickase Plasmid (h): sc-403767-NIC

WTAP (Wilms-Tumor-1-assoziiertes Protein) ist ein zentraler Bestandteil des mRNA‑N6‑Methyladenosin (m6A)‑„Writer“-Komplexes zusammen mit METTL3 und METTL14 und koordiniert die kotranskriptionelle RNA‑Methylierung, die das Spleißen der Prä‑mRNA, den nukleären Export, die Translation und die Stabilität von Transkripten beeinflusst. Über die Regulation von Transkripten, die mit Zellzyklus und Differenzierung assoziiert sind, trägt WTAP zu RNA‑Prozessierungsprogrammen bei, die Proliferation und Stressantworten prägen. Eine Fehlregulation der WTAP‑Expression oder der Aktivität des m6A‑Signalwegs wurde in mehreren Krebserkrankungen und in entwicklungsbiologischen Kontexten mit veränderten Genexpressionsnetzwerken in Verbindung gebracht, wodurch WTAP ein häufig untersuchter Knotenpunkt der epitranskriptomischen Kontrolle ist. Eine funktionelle Störung von WTAP wird daher eingesetzt, um m6A‑abhängige Mechanismen zu untersuchen, die das Schicksal von Transkripten und den zellulären Phänotyp steuern.

WTAP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WTAP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WTAP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WTAP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WTAP-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.