WTAP CRISPR Activation Plasmid (bovine): sc-437360-ACT

WTAP (Wilms-Tumor-1-assoziierendes Protein) ist eine zentrale Komponente des mRNA-N6-Methyladenosin-(m6A)-„Writer“-Komplexes und arbeitet mit METTL3/METTL14 zusammen, um die methylierungsabhängige Steuerung von RNA-Spleißen, -Stabilität, nukleärem Export und Translation zu koordinieren. In bovinen Zellen beeinflusst die WTAP-gekoppelte m6A-Regulation den Zellzyklus, die Linienspezifizierung und stressresponsive Genexpressionsprogramme durch posttranskriptionelles Remodeling der Transkriptome. Indem WTAP das Schicksal wichtiger regulatorischer mRNAs mitbestimmt, wirkt es auf Signalwege ein, die Proliferation und Differenzierung steuern; eine veränderte WTAP-Aktivität wurde in verschiedenen biologischen Kontexten mit dysreguliertem Wachstum und onkogenähnlicher Signalgebung in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen WTAP zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur epitranskriptomischen Kontrolle in Entwicklung, Stoffwechsel und krankheitsrelevanten zellulären Phänotypen.

WTAP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (bovine) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen -Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WTAP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (bovine) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des -Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WTAP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native -Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WTAP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WTAP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem -Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.