WSB1 Double Nickase Plasmid (h): sc-411879-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das WSB1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- WSB1 Double-Nickase-Plasmid (h) und WSB1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WSB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: WSB1: sc-393483
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
WSB1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-411879-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WSB1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411879-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WSB1 (WD-repeat and SOCS-box containing 1) kodiert eine Substraterkennungskomponente von Cullin-RING-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen und verknüpft dadurch spezifische Proteinziele mit Ubiquitinierung und proteasomalem Abbau. Über seine WD-Repeat-Domäne und die SOCS-Box trägt WSB1 zur Koordination der Proteinkontrolle (Protein-Quality-Control) und zur signalabhängigen Umgestaltung zellulärer Proteome bei, mit nachgelagerten Effekten auf Stressantworten, Wachstumsfaktorsignale und Transkriptionsprogramme. Eine veränderte WSB1-Aktivität wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen ubiquitinvermittelte Regulation zu krankheitsassoziierten Phänotypen beiträgt, darunter Tumorbiologie sowie eine fehlregulierte zelluläre Anpassung an Hypoxie und Stress. Als Knotenpunkt in der Schaltkreisebene des Ubiquitinwegs wird WSB1 häufig hinsichtlich seines Einflusses auf Pathway-Dynamik und proteostaseabhängige Regulation untersucht.
WSB1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WSB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WSB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WSB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WSB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.