Wnt-2b Double Nickase Plasmid (h): sc-405478-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Wnt-2b Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Wnt-2b Double-Nickase-Plasmid (h) und Wnt-2b Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WNT2B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Wnt-2b: sc-166502
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Wnt-2b Double Nickase Plasmid (h) | sc-405478-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Wnt-2b Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405478-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WNT2B kodiert Wnt-2b, einen sezernierten glykoproteinischen Liganden, der an Frizzled-/LRP-Rezeptoren bindet und so die Wnt-Signalübertragung während der Embryogenese und der Homöostase adulten Gewebes reguliert. Über Effekte auf die β‑Catenin‑abhängige Transkription und Crosstalk mit nicht-kanonischen Wnt-Signalwegen beeinflusst Wnt-2b die Festlegung von Zellschicksalen, Proliferation, Migration sowie epitheliale–mesenchymale Programme. Eine veränderte WNT2B-Expression oder ein veränderter Signalkontext wird mit dysregulierter Entwicklungsmusterbildung und Umbauprozessen in epithelialen und mesenchymalen Kompartimenten in Verbindung gebracht und wird häufig in krankheitsrelevanten Modellen untersucht, in denen die Aktivität des Wnt-Signalwegs Zellzustandsübergänge prägt. Als Knotenpunkt des Signalwegs stromaufwärts von Transkriptionsprogrammen, die Differenzierung und Gewebearchitektur steuern, wird WNT2B häufig analysiert, um ligandengesteuerte Signaldynamiken und Rezeptor‑Ligand‑Spezifität zu kartieren.
Wnt-2b Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WNT2B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WNT2B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WNT2B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WNT2B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.