Wnt-10a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403285-ACT

WNT10A codifica o Wnt-10a, um ligante secretado da família Wnt que regula a especificação do destino celular, a proliferação e o padrão tecidual por meio da sinalização canônica β-catenina/TCF e de vias Wnt não canônicas dependentes do contexto. A atividade do Wnt-10a influencia interações epitélio–mesênquima e programas de diferenciação, com papéis de destaque no desenvolvimento e na manutenção de apêndices ectodérmicos, como folículos pilosos e dentes. A desregulação da sinalização de WNT10A tem sido associada a displasias ectodérmicas congênitas e defeitos odontogênicos, e a expressão alterada também é estudada em cânceres, nos quais a remodelação da via Wnt afeta o comportamento de células tumorais e as respostas do estroma. Como nó de via, WNT10A é frequentemente utilizado para investigar efeitos específicos de ligantes Wnt sobre redes transcricionais, morfogênese e a dinâmica de células-tronco/progenitoras.

Wnt-10a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT10A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-10a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT10A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT10A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-10a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT10A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-10a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-10a em células tumorais com expressão de WNT10A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.