WDR73 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405788-ACT

WDR73 kodiert ein WD-Repeat-enthaltendes Protein, das an zytoplasmatischen und nukleären Prozessen beteiligt ist, die die Homöostase proliferierender Gewebe unterstützen. Berichtet wurden Rollen bei der Progression des Zellzyklus, der Organisation des Zytoskeletts und der Aufrechterhaltung der Zellmorphologie. WD-Repeat-Gerüste koordinieren häufig Multiprotein-Komplexe, was darauf hindeutet, dass WDR73 zu regulierten Signal- und Transportnetzwerken beiträgt, die die Entwicklung neuronaler und renaler Zellen prägen. Eine genetische Beeinträchtigung von WDR73 wurde mit neuroentwicklungsbedingten Auffälligkeiten und Nephropathie-Phänotypen in Verbindung gebracht, was mit Funktionen bei der Reifung von Gehirn und Niere übereinstimmt. Daher ist WDR73 für die Untersuchung von Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in Modellen neuroentwicklungsbezogener und renaler Erkrankungen sowie von Signalwegen, die Differenzierung und zelluläre Stressantworten steuern, von Interesse.

WDR73 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WDR73-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WDR73 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WDR73-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WDR73-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WDR73-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WDR73-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WDR73-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WDR73-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WDR73-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.