Particules Lentivirales d'Activation (m2) WDR5: sc-431247-LAC-2

Le gène murin Wdr5 code la protéine WDR5, une protéine échafaudage conservée à répétitions WD40 qui constitue un composant central des complexes de méthyltransférases de la famille SET/MLL ciblant l’histone H3K4, et qui coordonne des facteurs d’assemblage associés à la chromatine afin de réguler les programmes transcriptionnels. WDR5 soutient le contrôle épigénétique de l’expression génique via la régulation des promoteurs et des enhancers, influençant la progression du cycle cellulaire, la spécification des lignées et l’organisation du développement, et s’interface avec des réseaux plus larges de remodelage de la chromatine et de maturation des ARN. Des états de la chromatine dépendants de WDR5 dérégulés sont associés à des altérations de la différenciation et à des phénotypes prolifératifs observés dans le cancer et d’autres troubles d’origine épigénétique, ce qui fait de Wdr5 une cible précieuse pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle. L’édition génétique de Wdr5 dans des modèles murins permet l’analyse fonctionnelle des voies de méthylation de H3K4, la cartographie des interactions protéine–protéine au sein des complexes COMPASS/MLL, et l’étude des effets spécifiques au contexte sur la biologie des cellules souches et l’homéostasie tissulaire.

Les particules d'activation lentivirales WDR5 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Wdr5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales WDR5 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Wdr5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de WDR5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Wdr5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.