WDR5 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-431247-ACT-2

マウスのWdr5は、WDリピート含有タンパク質5（WDR5）をコードしており、WDR5はヒストンH3テールに結合してSET1/MLL複合体を組織化し、H3K4メチル化と転写活性化を促進する、保存性の高いクロマチン関連スキャフォールド因子である。WDR5はプロモーターおよびエンハンサーの状態を調節することで、胚発生、細胞運命の決定、増殖を制御する遺伝子発現プログラムのエピジェネティック制御を統括する。WDR5依存的なクロマチンリモデリングやH3K4メチル化の破綻は、がん化や発生異常に関わる異常な転写ネットワークと関連づけられており、エピゲノム駆動性疾患の機序解明に有用な標的となる。マウスモデルにおけるWdr5の遺伝子編集は、分化および疾患関連の細胞システムにおけるクロマチン複合体のアセンブリ、転写回路、機能ゲノミクスの研究を支援する。

WDR5 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Wdr5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WDR5 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Wdr5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWdr5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WDR5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWdr5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWDR5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWdr5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWDR5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。