WDR36 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410298

Descripción general

WDR36 (dominio de repeticiones WD 36) codifica una proteína nucleolar con repeticiones WD implicada en la biogénesis de ribosomas y el procesamiento del pre-rRNA, lo que favorece la maduración del rRNA 18S y el ensamblaje de la subunidad ribosomal pequeña. A través de su función en el nucléolo y en el metabolismo del ARN, WDR36 influye en la proteostasis y en programas de crecimiento celular que dependen de una traducción eficiente. Las variaciones genéticas y la alteración de la función de WDR36 se han asociado con fenotipos oculares, incluido el glaucoma primario de ángulo abierto, lo que impulsa estudios mecanísticos en tipos celulares relevantes. La alteración de WDR36 también puede utilizarse para investigar cómo las perturbaciones en la producción ribosomal activan respuestas de estrés nucleolar y la señalización posterior.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO WDR36 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WDR36 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WDR36 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WDR36 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WDR36.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WDR36 para la investigación de la señalización de WDR36, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de WDR36 críticos para la función de WDR36
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WDR36 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido WDR36 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido WDR36 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WDR36. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WDR36 (h) y el plásmido HDR WDR36 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WDR36 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WDR36 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.