Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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WDPCP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405848
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WDPCP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico WDPCP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: WDPCP Antibody (A-5): sc-514151
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WDPCP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405848 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
WDPCP (effettore della polarità planare cellulare contenente ripetizioni WD) codifica una proteina associata al centrosoma e alle ciglia, necessaria per la ciliogenesi primaria e per l’organizzazione legata alla polarità planare delle cellule. WDPCP favorisce l’ancoraggio del corpo basale e la formazione dell’assonema e contribuisce all’assemblaggio o alla funzione dei moduli della zona di transizione ciliare che coordinano il traffico dei componenti di segnalazione. Attraverso il suo ruolo nelle ciglia, WDPCP influenza vie dipendenti dalle ciglia come la segnalazione Hedgehog e programmi più ampi del citoscheletro e della polarità, importanti per l’architettura dei tessuti epiteliali. L’alterazione della funzione di WDPCP è associata a fenotipi da ciliopatia, inclusi difetti dello sviluppo e anomalie multisistemiche compatibili con un’alterata segnalazione ciliare e con difetti di morfogenesi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WDPCP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WDPCP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WDPCP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WDPCP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WDPCP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WDPCP per lo studio della segnalazione di WDPCP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni WDPCP critici per la funzione di WDPCP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WDPCP per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal WDPCP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WDPCP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WDPCP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal WDPCP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WDPCP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WDPCP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WDPCP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.