Plasmide CRISPR d'Activation (h) WDHD1: sc-408824-ACT

WDHD1 (WD repeat and HMG-box DNA binding protein 1) est un facteur conservé de réplication et de maintenance du génome qui coordonne l’initiation de la réplication de l’ADN, la progression des fourches de réplication et la réponse au stress réplicatif. Dans les cellules humaines, WDHD1 contribue à l’organisation du replisome et au bon déroulement de la phase S, en reliant la synthèse d’ADN aux points de contrôle et aux processus de réparation qui préservent l’intégrité du génome. Une expression ou une activité dérégulée de WDHD1 est associée à des phénotypes prolifératifs et a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux, ce qui concorde avec son rôle de soutien à un passage rapide du cycle cellulaire. En tant que régulateur associé à la chromatine de la dynamique de réplication, WDHD1 est fréquemment étudié dans les voies impliquées dans la signalisation des dommages à l’ADN, la stabilité des fourches de réplication et la ségrégation des chromosomes.

WDHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WDHD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WDHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WDHD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WDHD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WDHD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WDHD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WDHD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WDHD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de WDHD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.