Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400013-LAC

CDKN1A kodiert p21 (Waf1/Cip1), einen cyclinabhängigen Kinaseinhibitor, der Zellzyklus-Checkpoints durch Hemmung von CDK2- und CDK1-haltigen Komplexen durchsetzt und die Übergänge G1/S und G2/M koordiniert. p21 ist ein zentraler nachgeschalteter Effektor der p53-Signalkaskade und integriert DNA-Schadensantworten, Replikationsstress und Seneszenzprogramme, indem es die PCNA-abhängige DNA-Synthese und die Checkpoint-Kontrolle moduliert. Durch die Feinabstimmung von proliferativem Arrest gegenüber Erholung beeinflusst CDKN1A Signalwege, die mit genomischer Stabilität, zellulärer Differenzierung und stressadaptiven Prozessen in Nachbarschaft zur Apoptose verknüpft sind. Eine dysregulierte p21-Expression oder kontextabhängige Funktion wird in der Krebsbiologie, in Modellen der Therapieresistenz, bei fibroseassoziierter Seneszenz sowie bei Phänotypen des inflammatorischen Mikromilieus, die in humanen Zellen untersucht werden, in Zusammenhang gebracht.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CDKN1A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CDKN1A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Waf1/Cip1/CDKN1A p21-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CDKN1A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.