Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (h): sc-400013-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double-Nickase-Plasmid (h) und Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDKN1A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-6246
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400013-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400013-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN1A kodiert p21 (Waf1/Cip1), einen cyclinabhängigen Kinaseinhibitor, der Stresssignale integriert, um das Fortschreiten des Zellzyklus am G1/S-Kontrollpunkt zu bremsen. p21 wird als Reaktion auf DNA-Schäden insbesondere durch p53 stark induziert, hemmt CDK2- und CDK1-assoziierte Komplexe und moduliert die PCNA-abhängige DNA-Replikation und -Reparatur. Über diese Wechselwirkungen beeinflusst p21 Seneszenz, einen vorübergehenden Zellzyklusarrest sowie Zellschicksalsentscheidungen unter genotoxischem Stress. Eine fehlregulierte CDKN1A/p21-Signalgebung wird häufig mit onkogener Transformation und der Störung von Tumorsuppressor-Signalwegen in Verbindung gebracht und ist zudem relevant für Prozesse wie die Toleranz gegenüber Replikationsstress und Modelle therapieinduzierter Seneszenz.
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDKN1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDKN1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDKN1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDKN1A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.