VPS45 Lentiviral Activation Particles (h): sc-411599-LAC

VPS45 kodiert einen Regulator der Sec1/Munc18-Familie für die SNARE-abhängige Membranfusion, der für den endosomalen Transport und das Andocken von Vesikeln essenziell ist. In menschlichen Zellen unterstützt VPS45 die Funktion früher Endosomen und Recyclingwege, indem es das Andocken und die Fusion von Vesikeln koordiniert, was den Rezeptorumsatz, die Sortierung von Frachtproteinen und nachgelagerte Signalwege beeinflusst. Eine Störung von VPS45 beeinträchtigt den Transport vom Endosom zur Plasmamembran sowie die endolysosomale Homöostase – Prozesse, die mit einer eingeschränkten Funktion von Immunzellen und einer veränderten Proteostase in Verbindung stehen. Genetische Studien bringen VPS45 mit angeborenen Erkrankungen in Zusammenhang, die durch Immundysregulation und Entzündung gekennzeichnet sind, und unterstreichen damit seine Bedeutung für mechanistische Untersuchungen des intrazellulären Transports in Krankheitskontexten.

VPS45 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente VPS45-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

VPS45 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der VPS45-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen VPS45-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen VPS45-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.