Villin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400587

Panoramica

VIL1 codifica la villina, una proteina epitelio-specifica legante l’actina, arricchita nell’orletto a spazzola delle cellule intestinali e delle cellule del tubulo prossimale renale, dove organizza, “cappa” e recide la F-actina per modellare l’architettura dei microvilli. Attraverso un rimodellamento dell’actina regolato da Ca2+ e dai fosfoinositidi, la villina sostiene la polarità epiteliale, il traffico di membrana alla superficie apicale e la funzione di barriera durante differenziamento e rigenerazione. VIL1 è ampiamente utilizzato come marcatore della linea enterocitaria e della maturazione epiteliale, e un’alterata espressione o localizzazione della villina è riportata in contesti di danno e infiammazione gastrointestinali, nonché nella biologia dei tumori epiteliali. Queste proprietà rendono VIL1 un nodo pratico per studiare la dinamica del citoscheletro, la morfogenesi epiteliale e il mantenimento dei microvilli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Villin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VIL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VIL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VIL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Villin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VIL1 per lo studio della segnalazione di Villin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VIL1 critici per la funzione di Villin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VIL1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Villin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Villin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VIL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Villin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Villin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VIL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VIL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.