VAMP-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402306

Descripción general

VAMP3 codifica la proteína de membrana asociada a vesículas 3 (VAMP-3), una v-SNARE que media eventos de fusión de membranas necesarios para la exocitosis constitutiva y regulada. Participa en el tráfico vesicular entre los endosomas de reciclaje y la membrana plasmática, apoyando el reciclaje de receptores, la secreción de citocinas y la entrega de proteínas de membrana durante la migración y la polarización celular. La función de VAMP-3 se interseca con vías de clasificación endosomal y de ensamblaje de complejos SNARE que modelan la activación de células inmunitarias y las interacciones huésped–patógeno. El tráfico vesicular desregulado que involucra a VAMP3 se ha estudiado en contextos como la inflamación, alteraciones en la dinámica de los transportadores de glucosa y cambios asociados al cáncer en el recambio de membrana y la invasión.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VAMP-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VAMP3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VAMP3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VAMP3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VAMP-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VAMP3 para la investigación de la señalización de VAMP-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VAMP3 críticos para la función de VAMP-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VAMP3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VAMP-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VAMP-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VAMP3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VAMP-3 (h) y el plásmido HDR VAMP-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VAMP3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VAMP3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.