V-ATPase D2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404907-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das V-ATPase D2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- V-ATPase D2 Double-Nickase-Plasmid (h) und V-ATPase D2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP6V0D2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: V-ATPase D2: sc-517031
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
V-ATPase D2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404907-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase D2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404907-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0D2 kodiert die D2‑Untereinheit der vakuolären H\+-ATPase (V‑ATPase), einer aus mehreren Untereinheiten bestehenden Protonenpumpe, die Endosomen, Lysosomen und andere intrazelluläre Kompartimente ansäuert. Die durch die V‑ATPase vermittelte Ansäuerung von Organellen unterstützt die lysosomale Proteolyse, den endozytotischen Transport, die Autophagie sowie die pH‑abhängige Reifung von Rezeptoren und Enzymen und ist damit in Signalwege eingebunden, die den zellulären Stoffwechsel und die Signalübertragung regulieren. In Zellen der myeloischen Linie wird ATP6V0D2 mit der Funktion von Osteoklasten und der Knochenresorption in Verbindung gebracht, da es zum Protonentransport beiträgt, der für den Abbau der Matrix erforderlich ist. Eine fehlregulierte V‑ATPase‑Aktivität und eine veränderte Homöostase des vesikulären pH‑Werts werden im Zusammenhang mit Störungen des Knochenumbaus sowie mit breiteren entzündlichen und neurodegenerativen Prozessen untersucht, die mit einer beeinträchtigten Lysosomenfunktion verknüpft sind.
V-ATPase D2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP6V0D2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP6V0D2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP6V0D2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP6V0D2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.