Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
V-ATPase A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400975-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das V-ATPase A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- V-ATPase A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und V-ATPase A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP6V0A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: V-ATPase A1: sc-374475
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
V-ATPase A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400975-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400975-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0A1 kodiert die a1-Isoform der a‑Untereinheit der V0‑Domäne innerhalb der vakuolären H\+-ATPase (V‑ATPase), einer aus mehreren Untereinheiten bestehenden Protonenpumpe, die Endosomen, Lysosomen und sekretorische Vesikel ansäuert. Die von der V‑ATPase vermittelte Ansäuerung von Organellen unterstützt die rezeptorvermittelte Endozytose, den lysosomalen Abbau, die Autophagie und den vesikulären Transport und beeinflusst über die Lysosomenfunktion zudem die mTORC1-Signalgebung sowie die zelluläre Nährstoffsensorik. Durch die Kontrolle des luminalen pH-Werts trägt V‑ATPase A1 außerdem zur Proteostase und zu Membranfusionsereignissen bei, die für eine effiziente Fracht-/Cargosortierung erforderlich sind. Eine Fehlregulation der V‑ATPase-Aktivität und der endolysosomalen Ansäuerung wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen, veränderter synaptischer Funktion sowie allgemeineren Defekten der zellulären Homöostase in Zusammenhang gebracht, die für Krankheitsmechanismen relevant sind.
V-ATPase A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP6V0A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP6V0A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP6V0A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP6V0A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.