Particules Lentivirales d'Activation (h) utrophin: sc-400522-LAC

Le gène humain **UTRN** code l’utrophine, un adaptateur cytosquelettique associé à la dystrophine qui relie la F-actine au complexe dystroglycane au niveau du sarcolemme, contribuant ainsi à l’organisation de la stabilité membranaire et de la transduction des signaux. L’utrophine participe à l’assemblage et au maintien du complexe dystrophine–glycoprotéines et s’inscrit dans des interactions avec la matrice extracellulaire qui influencent la mécanotransduction et la polarité cellulaire. Son expression est régulée au cours du développement et peut être modulée en réponse aux lésions musculaires et au remodelage, ce qui la rend pertinente pour l’étude de l’intégrité des myofibres et de l’organisation de la jonction neuromusculaire. Des modifications des niveaux d’utrophine et de sa localisation sont fréquemment examinées dans le contexte des dystrophinopathies et de modèles apparentés de dégénérescence musculaire, en tant que paralogue fonctionnel impliqué dans la même voie structurale.

Les particules d'activation lentivirales utrophin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de UTRN dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales utrophin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription UTRN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de utrophin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif UTRN ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.