USP47 Lentiviral Activation Particles (h): sc-403157-LAC

USP47 (Ubiquitin-spezifische Peptidase 47) ist ein menschliches deubiquitinierendes Enzym, das Ubiquitin von Proteinsubstraten entfernt und dadurch deren Stabilität, Lokalisation und Signalwirkung moduliert. Durch die gezielte Beeinflussung des ubiquitinabhängigen Proteinabbaus trägt USP47 zur Proteostase bei und wirkt über die Regulation der Ubiquitinierungsdynamik auf Signalwege ein, die mit DNA-Schadenssignalen, Zellzykluskontrolle und Stressantworten verknüpft sind. Veränderte Deubiquitinierungsnetzwerke unter Beteiligung von USP47 wurden in mehreren Krankheitskontexten mit fehlregulierten Wachstums- und Genomstabilitätsprogrammen in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung als Knotenpunkt in Ubiquitin-Proteasom- und reparaturassoziierten Schaltkreisen unterstützt. Funktionelle Studien untersuchen häufig, wie eine USP47-abhängige Deubiquitinierung unter Basalbedingungen oder nach genotoxischer Belastung Transkriptionsprogramme und Signalwegaktivitäten umformt.

USP47 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente USP47-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

USP47 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der USP47-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen USP47-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen USP47-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.