USP24 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411721-ACT

L’USP24 umano codifica una proteasi specifica per l’ubiquitina che rimuove le frazioni di ubiquitina dalle proteine bersaglio, contribuendo al mantenimento della proteostasi tramite la regolazione della stabilità dei substrati, del loro traffico intracellulare e dell’output di segnalazione. Come componente del sistema ubiquitina–proteasoma, USP24 influenza le risposte allo stress cellulare, la segnalazione del danno al DNA e il controllo dei checkpoint modulando il turnover di proteine regolatorie chiave. Alterazioni nella dinamica di deubiquitinazione che coinvolge USP24 sono state associate, in contesti rilevanti per la patologia, a una progressione deregolata del ciclo cellulare, a segnali apoptotici aberranti e al rimodellamento delle vie infiammatorie. Queste caratteristiche rendono USP24 un bersaglio utile per analizzare il controllo ubiquitina-dipendente dei programmi trascrizionali e delle reti di segnalazione in modelli cellulari umani.

USP24 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di USP24 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USP24 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus USP24 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione USP24, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USP24. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus USP24 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USP24 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USP24 nelle cellule tumorali con espressione di USP24 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.