USP14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425567
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- USP14 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico USP14, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: USP14 Anticuerpo (6E6): sc-100630
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
USP14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-425567 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Usp14 codifica la peptidasa 14 específica de ubiquitina (USP14), una enzima desubiquitinante asociada al proteasoma que recorta cadenas de ubiquitina y regula el procesamiento de sustratos en el proteasoma 26S. Al modular el reciclaje de ubiquitina y el recambio proteico, USP14 influye en la proteostasis, las respuestas al estrés y las salidas de señalización vinculadas a la degradación dependiente de ubiquitina. En células de ratón, la alteración de la actividad de USP14 se ha relacionado con trastornos en el mantenimiento neuronal y la función sináptica, en consonancia con la importancia de una dinámica equilibrada del proteasoma en la neurobiología. USP14 también se cruza con vías que gobiernan el control de calidad proteica y la homeostasis celular, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la disfunción del sistema ubiquitina–proteasoma.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO USP14 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Usp14 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Usp14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Usp14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína USP14.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Usp14 para la investigación de la señalización de USP14, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Usp14 críticos para la función de USP14
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Usp14 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido USP14 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido USP14 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Usp14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR USP14 (m) y el plásmido HDR USP14 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Usp14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Usp14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.