USF-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401345-ACT

USF1 kodiert den upstream stimulatory factor 1 (USF-1), einen ubiquitär exprimierten bHLH-Leucin-Zipper-Transkriptionsfaktor, der an E-Box-Motive bindet und Genprogramme koordiniert, die den Glukose- und Lipidstoffwechsel, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie das Zellwachstum steuern. USF-1 reguliert Transkriptionsnetzwerke nachgeschaltet an Nährstoff- und Hormonsignalen und integriert Signale aus Signalwegen wie dem insulinresponsiven Stoffwechsel und stressaktivierten Signalkaskaden, um die zelluläre Homöostase zu formen. Genetische und Expressionsstudien bringen eine veränderte USF1-Aktivität mit Dyslipidämie, kardiometabolischen Merkmalen und breiteren regulatorischen Variationen in Verbindung, die die Expression entzündungs- und stoffwechselbezogener Gene beeinflussen. Entsprechend wird USF1 häufig als transkriptioneller Knotenpunkt untersucht, der die metabolische Regulation mit Gen-Umwelt-Interaktionen in menschlichen Zellen verknüpft.

USF-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen USF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

USF-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des USF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der USF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen USF-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native USF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von USF-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des USF-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem USF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.