Plásmido Doble Nickase (h) UPIIIa: sc-401796-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)UPIIIa consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa UPIIIa (h) y el plásmido de doble nickasa UPIIIa (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a UPK3A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UPIIIa Anticuerpo (C-6): sc-166808
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) UPIIIa | sc-401796-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) UPIIIa | sc-401796-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UPK3A codifica la uroplaquina IIIa (UPIIIa), una glucoproteína de membrana tipo I que se ensambla con otras uroplaquinas para formar placas uroteliales en la superficie apical de las células paraguas de la vejiga. Este complejo mantiene la integridad de la barrera epitelial, la especialización de la membrana y las respuestas al estiramiento mecánico, contribuyendo a la diferenciación urotelial y a la homeostasis tisular. Los patrones de expresión alterados de uroplaquinas se utilizan con frecuencia como indicadores del estado del urotelio y de la identidad de linaje en estudios del desarrollo vesical y de la patología. Por ello, las perturbaciones relacionadas con UPK3A son relevantes para la investigación de la disfunción de la barrera urotelial, la remodelación epitelial y los fenotipos moleculares asociados a contextos de enfermedad de la vejiga.
UPIIIa El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UPK3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UPK3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UPK3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UPK3A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.