Plasmide CRISPR d'Activation (h) UPIa: sc-402951-ACT

Le gène humain **UPK1A** code l’uroplakine‑1a (UPIa), une protéine membranaire tétraspanique qui s’assemble avec d’autres uroplakines pour former des plaques urothéliales rigides à la surface apicale des cellules « parapluie ». Ces plaques soutiennent l’intégrité de la barrière épithéliale et contribuent au trafic membranaire ainsi qu’aux programmes de différenciation terminale qui maintiennent l’architecture spécialisée des voies urinaires. L’expression de **UPK1A** est couramment utilisée comme marqueur de lignée de l’urothélium différencié, et sa dérégulation est étudiée dans le contexte du remodelage urothélial et de la biologie du cancer de la vessie. Une composition uroplakinique altérée peut affecter les interactions cellule–cellule et l’organisation de la membrane apicale, des processus pertinents pour le phénotype tumoral et la plasticité épithéliale.

UPIa Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UPK1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UPIa Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UPK1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UPK1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UPIa. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UPK1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UPIa au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UPIa dans les cellules tumorales présentant une expression de UPK1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.