UPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423623

Übersicht

Das murine Upp1 kodiert die Uridinphosphorylase (UPase), ein Schlüsselenzym des Pyrimidin-Salvage-Wegs, das die reversible Phosphorolyse von Uridin zu Uracil und Ribose-1-phosphat katalysiert. Durch die Regulation zellulärer Nukleosid-Pools beeinflusst UPase die Verfügbarkeit von RNA-/DNA-Vorstufen und ist in Programme des Nukleotidstoffwechsels eingebunden, die Proliferation und metabolische Anpassung unterstützen. Die Expression von Upp1 und die UPase-Aktivität wurden in Zusammenhängen von Gewebeumbau und Stressantworten untersucht, in denen Verschiebungen im Nukleosidumsatz die zelluläre Homöostase verändern können. Als metabolischer Knotenpunkt wird Upp1 häufig genutzt, um Zusammenhänge zwischen dem Pyrimidinstoffwechsel, dem mitochondrialen und Redox-Gleichgewicht sowie dem Crosstalk von Signalwegen zu untersuchen, die Wachstums- und Überlebensphänotypen beeinflussen.

Das UPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Upp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Upp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Upp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UPase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Upp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UPase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Upp1-Exone abzielen, die für die UPase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Upp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Upp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UPase HDR-Plasmid (m) und UPase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Upp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Upp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.