UGT1A9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417693-ACT

UGT1A9 は、さまざまな外来性化合物（キセノバイオティクス）や内因性の低分子に対するグルクロン酸抱合（グルクuronidation）を触媒するヒト UDP-グルクロン酸転移酵素をコードしており、これらの水溶性を高めて体内からの排泄を促進します。第II相代謝酵素として、UGT1A9 は CYP 依存性の酸化、レドックス恒常性、トランスポーターによる体内動態経路と連動する、肝および肝外の解毒ネットワークに寄与します。UGT1A9 の発現量や活性の変動は、薬物や代謝物の細胞内での取り扱いを変化させ、代謝物に起因するストレス応答に対する感受性に影響し得ます。研究用途では、UGT1A9 はグルクロン酸抱合能、ケミカルバイオロジー、ならびに生体内変換における個体差を検討するための重要な結節点として用いられます。

UGT1A9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UGT1A9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGT1A9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UGT1A9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUGT1A9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGT1A9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUGT1A9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGT1A9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUGT1A9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGT1A9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。