UFSP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-408911-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UFSP2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UFSP2 Double-Nickase-Plasmid (h) und UFSP2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UFSP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UFSP2: sc-376084
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UFSP2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408911-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UFSP2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408911-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UFSP2 kodiert die UFM1-spezifische Peptidase 2, eine Cysteinprotease, die UFM1 zu seiner reifen Form prozessiert und UFM1-Modifikationen von Substratproteinen entfernt und damit den UFMylierungszyklus reguliert. Diese Aktivität unterstützt Proteostase‑Signalwege, die mit der Homöostase des endoplasmatischen Retikulums, der ribosomenassoziierten Qualitätskontrolle und stressresponsiver Signalgebung verknüpft sind und die Proteinsynthese und ‑sekretion beeinflussen. UFSP2‑abhängige UFMylierungsdynamiken wurden mit der Funktion hämatopoetischer und immunologischer Zellen in Verbindung gebracht, und eine veränderte Regulation dieses Signalwegs wurde in Krankheitskontexten beim Menschen impliciert, in denen ER‑Stress und Proteinkontrolle gestört sind. Als Forschungsziel wird UFSP2 eingesetzt, um zu untersuchen, wie De‑UFMylierung den Umsatz von Substraten und die Stressanpassung in unterschiedlichen Zelltypen steuert.
UFSP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UFSP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UFSP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UFSP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UFSP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.