Plasmide Double Nickase (h) UCP4: sc-417530-NIC

SLC25A27 code la protéine découplante 4 (UCP4), un transporteur de la membrane interne mitochondriale qui module la fuite de protons et l’efficacité du couplage mitochondrial, influençant ainsi la production de la phosphorylation oxydative et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. UCP4 est particulièrement abondante dans les tissus nerveux et est associée à la régulation du potentiel de membrane mitochondrial, de la gestion du calcium et des réponses au stress cellulaire qui influencent le métabolisme et la survie neuronale. Par ses effets sur la bioénergétique mitochondriale, UCP4 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant l’équilibre rédox et la mort cellulaire programmée, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la neurodégénérescence et de la vulnérabilité métabolique. Une expression ou une activité altérée d’UCP4 a été associée à une perturbation de l’homéostasie énergétique dans des contextes pathologiques, ce qui soutient des investigations mécanistiques dans des modèles de cellules humaines.

UCP4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC25A27 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC25A27. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC25A27. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC25A27.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.