UBA52 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423573

Panoramica

Uba52 codifica una proteina di fusione ubiquitina–proteina ribosomiale (UBA52) che viene processata per generare ubiquitina e la proteina ribosomiale L40, collegando la disponibilità di ubiquitina alla biogenesi dei ribosomi e alla proteostasi globale. Attraverso vie dipendenti dall’ubiquitina, UBA52 sostiene il turnover proteico regolato tramite il proteasoma, influenza le risposte cellulari allo stress e contribuisce al controllo della traduzione. Alterazioni dell’omeostasi dell’ubiquitina e della funzione ribosomiale sono ampiamente rilevanti per i meccanismi di stress proteotossico, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione infiammatoria. Poiché l’ubiquitinazione e il controllo della traduzione sono spesso modificati nella biologia dei tumori e in modelli di neurodegenerazione, Uba52 rappresenta un nodo utile per studiare come la proteostasi influenzi la fitness cellulare e l’adattamento allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBA52 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Uba52 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Uba52 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Uba52 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBA52.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Uba52 per lo studio della segnalazione di UBA52, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Uba52 critici per la funzione di UBA52
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Uba52 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBA52 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UBA52 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Uba52. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBA52 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UBA52 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Uba52 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Uba52 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.