Plasmide CRISPR/Cas9 KO Type II 5-phosphatase (m): sc-421136

Présentation

La protéine murine Inpp5b code une 5‑phosphatase de type II (INPP5B), une 5‑phosphatase des polyphosphates de l’inositol qui hydrolyse le phosphatidylinositol 4,5‑bisphosphate et des phosphoinositides apparentés afin de moduler la signalisation lipidique membranaire. En contrôlant les pools locaux de PIP2, INPP5B influence des voies dépendantes des phosphoinositides impliquées dans l’endocytose, le trafic vésiculaire et le remodelage du cytosquelette d’actine, avec des effets en aval sur la signalisation des récepteurs et la dynamique membranaire. La fonction d’INPP5B s’inscrit étroitement dans les circuits de signalisation PI3K/PLC et recoupe des processus de trafic associés aux cils et à l’appareil de Golgi. Une dérégulation du renouvellement des phosphoinositides est largement impliquée dans des défauts de l’homéostasie cellulaire, ce qui fait d’Inpp5b une cible utile pour des études mécanistiques des phénotypes de signalisation et de transport membranaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Type II 5-phosphatase (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Inpp5b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Inpp5b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Inpp5b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Type II 5-phosphatase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Inpp5b pour l'étude de la signalisation de Type II 5-phosphatase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Inpp5b essentiels à la fonction de Type II 5-phosphatase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Inpp5b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Type II 5-phosphatase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Type II 5-phosphatase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Inpp5b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Type II 5-phosphatase plasmide HDR (m) et le Type II 5-phosphatase (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Inpp5b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Inpp5b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.