TSPAN7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404065-ACT

Tetraspanin 7 (TSPAN7) ist ein vierfach die Membran durchspannendes Scaffold-Protein, das tetraspaninangereicherte Mikrodomänen organisiert und die laterale Assemblierung von Zelloberflächenrezeptoren, Integrinen und Signaladapterproteinen koordiniert. In menschlichen Zellen beeinflusst TSPAN7 den Membrantransport, die Dynamik des Aktin-Zytoskeletts sowie Prozesse der Zell‑Zell‑Kommunikation, die Adhäsions- und Motilitätsprogramme prägen, mit wichtigen Funktionen in der neuronalen Entwicklung und der synaptischen Organisation. Über diese membranassoziierten Plattformen kann TSPAN7 die Rezeptorverteilung und nachgeschaltete Signalkaskaden modulieren, die mit Endozytose und zytoskelettalem Umbau verknüpft sind. Eine veränderte Expression oder Funktion von TSPAN7 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Zusammenhang gebracht und in Kontexten untersucht, in denen Membranorganisation und Signalkompetenz zu krankheitsrelevanten zellulären Zuständen beitragen.

TSPAN7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TSPAN7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TSPAN7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TSPAN7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TSPAN7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TSPAN7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TSPAN7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TSPAN7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TSPAN7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TSPAN7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.