TSG-6 Double Nickase Plasmid (h): sc-400765-NIC

TNFAIP6 kodiert das Tumornekrosefaktor-stimulierte Gen 6 (TSG-6), ein sezerniertes Hyaladherin, das durch inflammatorische Zytokine induziert wird und die extrazelluläre Matrix durch Interaktionen mit Hyaluronan und den schweren Ketten des Inter-α-Inhibitors umgestaltet. Durch die Katalyse und Stabilisierung von Hyaluronan–Schwerkette-Komplexen sowie die Modulation der Proteaseaktivität beeinflusst TSG-6 die Leukozytenmigration, Gewebeödeme und die wundenassoziierte Organisation der Matrix. Die Expression von TNFAIP6 ist mit NF-κB-getriebenen Entzündungsprogrammen und mikroumgebungsabhängigen Signalen verknüpft, die die Kommunikation zwischen Stroma und Immunsystem prägen. Eine fehlregulierte TSG-6-Biologie wurde mit chronischen Entzündungszuständen und tumorassoziiertem Stroma in Verbindung gebracht und stellt damit einen relevanten Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Wechselwirkung zwischen Matrix und Entzündung dar.

TSG-6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TNFAIP6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TNFAIP6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TNFAIP6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TNFAIP6-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.