TRIM72 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403554-ACT

TRIM72（MG53としても知られる）は、筋肉に豊富に発現するトリパルタイトモチーフ（TRIM）ファミリーのE3ユビキチンリガーゼであり、膜損傷を感知して損傷部位への小胞の迅速な動員を促進することで、細胞膜（形質膜）の修復を統括します。ヒト細胞においてTRIM72は、ユビキチン依存的な分解（ターンオーバー）を介してタンパク質恒常性を調節し、細胞骨格の再構築や膜輸送に関連するストレス応答シグナル伝達にも関与します。これらの過程は、細胞傷害後の筋線維の完全性、カルシウム恒常性の制御、炎症シグナル伝達を担う経路と交差します。TRIM72活性の破綻は膜修復不全や筋病変と関連づけられており、ミオパチー、心代謝ストレス、ならびに組織損傷応答の研究における重要性を支持しています。

TRIM72 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRIM72の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRIM72 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRIM72 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRIM72転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRIM72の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRIM72遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRIM72依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRIM72発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRIM72経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。