TRIM69 Double Nickase Plasmid (h): sc-404906-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRIM69 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRIM69 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRIM69 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRIM69 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRIM69 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404906-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIM69 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404906-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM69 kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase der Tripartite-Motif-(TRIM-)Familie, die an der ubiquitinabhängigen Regulation von Proteinstabilität und Signalübertragung beteiligt ist. Als RING-B-Box-Coiled-Coil-Protein steht TRIM69 mit der angeborenen Immunsteuerung antiviraler Antworten und der Modulation interferonassoziierter Signalwege in Verbindung, indem es den Abbau oder die Aktivität zentraler Signalmoleküle beeinflusst. Veränderungen in Ubiquitinierungsprogrammen der TRIM-Familie können inflammatorische Signalgebung, Stressantworten und Zellzustandsübergänge neu ausrichten, wodurch TRIM69 für mechanistische Studien zur Immunregulation und zu Wirt–Pathogen-Interaktionen relevant ist. Eine Fehlregulation der mit TRIM69 verknüpften Ubiquitin-Schaltkreise wurde zudem in Kontexten untersucht, in denen eine gestörte Proteostase und Immun-Signalgebung zu Krankheitsphänotypen beitragen.
TRIM69 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRIM69-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRIM69 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRIM69-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRIM69-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.