TRAF6 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400117-LAC

TRAF6 (TNF-Rezeptor-assoziierter Faktor 6) ist eine E3-Ubiquitin-Ligase und ein Adapterprotein, das in der angeborenen Immunität und Entzündungssignalkaskaden vorgelagerte Rezeptoren mit nachgeschalteten Signalwegen koppelt. Es vermittelt K63-verknüpfte Polyubiquitinierung zur Aktivierung von TAK1 und dem IKK-Komplex, wodurch die NF-κB- und MAPK-(JNK/p38)-Signalwege angetrieben werden, und es greift in bestimmten Kontexten auch in IRF-abhängige Antworten ein. TRAF6 wirkt nachgeschaltet von Toll-like-Rezeptoren, Mitgliedern der IL-1-Rezeptorfamilie und RANK und beeinflusst dadurch die Zytokinproduktion, die Osteoklastendifferenzierung sowie Programme zur Zellüberlebenssicherung. Eine fehlregulierte TRAF6-Signalgebung wurde mit chronisch-entzündlichen Zuständen, autoimmunen Phänotypen, Defekten der Knochenremodellierung und onkogenen Signalnetzwerken in mehreren Tumorarten in Verbindung gebracht.

TRAF6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TRAF6-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TRAF6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TRAF6-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TRAF6-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TRAF6-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.