TRAF3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423494-ACT

Das Mausgen *Traf3* kodiert TRAF3, ein Adapterprotein und eine E3-Ubiquitin-Ligase, die mehrere Rezeptoren mit nachgeschalteter Signalübertragung koppelt, darunter Mitglieder der TNF-Rezeptor-Superfamilie, Toll-like-Rezeptoren und RIG-I–ähnliche Rezeptoren. TRAF3 trägt dazu bei, die kanonische und nicht-kanonische NF-κB-Aktivität auszubalancieren, und reguliert IRF3/IRF7-abhängige Typ-I-Interferonantworten durch ubiquitinabhängige Kontrolle von Kinasekomplexen wie TBK1 und IKK. Über diese Signalwege beeinflusst TRAF3 die Aktivierung angeborener und adaptiver Immunzellen, die Zytokinproduktion und die antivirale Abwehr. Eine fehlregulierte TRAF3-Signalgebung wurde mit Immunungleichgewichten und entzündungsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch *Traf3* einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur rezeptornahen Signalübertragung und zu Transkriptionsprogrammen in Mausmodellen darstellt.

TRAF3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Traf3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRAF3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Traf3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Traf3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRAF3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Traf3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRAF3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRAF3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Traf3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.